3. ANTIBIOGRAMA
3.1 Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro" de las bacterias a los antibióticos. Por extensión, se suele incluir el estudio de la sensibilidad a las sulfamidas y otros quimioterápicos.
Utilidad: La razón por la cual es conveniente el estudio del antibiograma de una bacteria determinada radica en el hecho de la diferente sensibilidad a los antibióticos de las distintas especies bacterianas y, más aún, en el hecho de que en numerosas especies existen grandes diferencias de sensibilidad a un determinado antibiótico entre unas y otras cepas.
El antibiograma es un método de diagnóstico rápido y preciso
Con ayuda del antibiograma se puede escoger el antibiótico más adecuado para el tratamiento de una enfermedad.3.2. Método de la difusión en medio sólido
Se siembra, con el gérmen a estudiar, una placa de un medio de cultivo adecuado. Sobre la superficie del medio se colocan discos de papel impregnados con el antibiótico o quimioterápico a ensayar. Si el germen estudiado es sensible, en torno al disco se observará un halo, en el cual no hay proliferación de bacterias. Si el germen es resistente al antibiótico, crecerá uniformemente y no habrá ningún halo de inhibición en torno al disco de papel.
3.3. Preparación de los discos impregnados de antibiótico para realizar un antibiograma.
En las casas de productos de laboratorio pueden adquirir se los discos que se emplean para hacer un antibiograma. Sin embargo, como aprendizaje, y con bastante fiabilidad, es fácil prepararlos a partir de las cápsulas, comprimidos grageados o viales de 250 mg ó 500 mg de los antibióticos que expenden en las farmacias.
Para que la concentración de antibiótico que impregna los discos no sea ni excesiva ni insuficiente, y sea posible distinguir los halos de inhibición, se puede proceder del siguiente modo, realizando un banco de diluciones.
La concentración de 0,1 mg/cl ya es adecuada para trabajar.
Para evaluar, aproximadamente, el volumen de una gota se pueden colocar en una probeta gra duada 100 gotas calculando el volumen que ocupan; dividiendo por 100 tendremos el volumen que corresponde a una gota. Suponiendo que el volumen hallado para una gota sea de 0,003 ml, la expresión 0,1 x 0,003 nos dará la concentración de antibiótico en mg/ gota. De este modo sabremos la concentración de antibiótico con que impregnamos los discos de papel secante, que se acostumbran a tomar de 6,5 m m de diámetro. Repitiendo la operación con cápsulas de distintos antibióticos podremos preparar diferentes discos.3.4 Medios de cultivo.
Los distintos microorganismos tienen distintas exigencias tanto en los que se refiere al medio nutritivo en sí como a la temperatura de incubación ya las condiciones atmosféricas. Casi todos los microorganismos pueden cultivarse en medios nutritivos inertes. Hay medios de cultivo líquidos y sólidos; de hecho los sólidos son medios de cultivo líquidos a los que se adicionan diferentes sustancias, las más utilizadas son el agar y la gelatina.
Agar ordinario
peptona 15 gr/l
NaCl 5gr/l
agar 12gr/l
Agar nutritivo
Agar nutritivo
Agar ordinario más 10 gr/1 de glucosa Los medios de cultivo deben estar ajustados a un pH adecuado. El agar ordinario y el agar nutritivo a un pH = 7,2. El ajuste se realiza con NaOH y/o HCl en soluciones 1 N y 1/10N. Se acos- tumbra a hacer antes de la esterilización, aunque, a veces, debe hacerse después. La esterilización de los medios de cultivo se hace generalmente calentándolos en un autoclave a 121° C ya una atmósfera de presión de vapor, durante 15-30 minutos. Alternativamente puede utilizarse una olla a presión adecuada.
3.5 Lectura del antibiograma.
Una vez sembrada una placa de un medio de cultivo adecuado y colocados los distintos discos im pregnados de antibiótico y una vez colocada a incubación en la estufa durante unas horas, se procede a la lectura de los resultados, que puede hacerse a intervalos periódicos, basada en la medi ción del halo de inhibición. Según la amplitud de este halo los gérmenes se clasifican en:
-RESISTENTES
-SENSIBLES
-MUY SENSIBLES
Debe tenerse presente que el diámetro del halo de inhibición depende también de la difusibilidad del antibiótico y, por tanto, no es una medida absoluta de la eficacia.
Los datos que proporciona el antibiograma son muy valiosos pero su aplicación no es tan sencilla. Para la prescripción correcta de los antibióticos hay que tener en cuenta siempre la naturaleza del proceso infeccioso, la historia clínica del paciente, el mecanismo de acción del antibiótico, la toxicidad, las posibles sensibilizaciones del paciente, la vía de administración, etc.
¿A qué antibióticos es resistente la bacteria problema ?
¿A qué antibióticos es sensible?
